暗視野顯微鏡是光學顯微鏡的一種，其聚光鏡中央有擋光片，使照明光線不直接進入物鏡，只允許被標本反射和衍射的光線進入物鏡，因而視野的背景是黑的，物體的邊緣是亮的。利用這種顯微鏡能見到小至 4~200nm的微粒子，分辨率可比普通顯微鏡高50倍。而為了保障檢測精準，就需要對暗視野顯微鏡檢查操作及注意事項有充分的了解。

在暗視野顯微鏡檢查操作上，首先把暗視野聚光器裝在顯微鏡的聚光器支架上。然后選用強的光源，但又要防止直射光線進入物鏡，所以一般用顯微鏡燈照明。其次在聚光器和標本片之間要加一滴香柏油，目的是不使照明光線于聚光鏡上面進行全反射，達不到被檢物體，而得不到暗視野照明。升降集光器，將集光鏡的焦點對準被檢物體，即以圓錐光束的頂點照射被檢物。如果聚光器能水平移動并附有中心調節裝置，則應首先進行中心調節，使聚光器的光軸與顯微鏡的光軸嚴格位于一直線上。再選用與聚光器相應的物鏡，調節焦距，找到所需觀 察的物像。

使用暗視野顯微鏡時，照明光源的照明強度要高，否則樣品的反射光強度不夠，影響觀察效果。暗視野顯微鏡鏡檢時室內要暗，如果沒有這樣的條件，應盡可能使用遮光裝置，以阻止目鏡周圍的光線射入。并且，若視場中樣品與背景明暗反差不強時，可以上下調節聚光器的位置，使視場內的反差提高。載玻片的厚度要適宜，照明光束經暗視野顯微鏡聚光器后，產生空心照明光錐，即ZX為暗區。而反射光的焦點在聚光器上透鏡表面之上，很短的距離。因此，載玻片的適宜厚度為0.8～1.2mm。

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