光學金相顯微鏡成像的清晰度往往關乎著檢測結果，而不論何種顯微鏡，物距必須與物鏡焦距相對應，以保證獲得清晰的圖像，即為調焦。調焦操作通常利用載物臺或鏡筒的升降來完成。一般來說，大直徑的手輪做粗調焦，小直徑的手輪做微動調整。另外光學金相顯微鏡成像清晰，還有以下幾點注意。

在觀察時盡可能使用消色差物鏡，在調焦過程中會明顯看到視場邊緣和中心的清晰度不同，這是由于該類物鏡像差校正不充分的緣故。即使像差校正良好的物鏡，也是在視場中心部分的各種像差值較小，成像較清晰。故在使用顯微鏡時，應盡量將所需觀察的金相組織移至視場中心。

光學金相顯微鏡成像清晰度也與光學系統有關，光學系統可以分為有限遠和無限遠光學系統，而大家往往更喜歡選擇帶有無限遠光學系統的顯微鏡，這主要得益于無限遠的倒置顯微鏡成像原理是由標本通過物鏡的光線不在物鏡成像，而是作為無限遠的平行光束進入成像透鏡由成像透鏡形成中間像。而有限遠金相顯微鏡則采用由標本通過物鏡的光線不在物鏡成像，兩者相比較而言，無限遠的成像模式更加清晰。

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